实时荧光定量PCR（qPCR）通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过CT值对未知模板进行相对或绝对定量分析。是转录组研究中高通量测序结果常用的独立验证手段，用于确认差异表达基因的真实性与表达趋势。
荧光染料非特异性结合双链DNA，通用性强、成本较低，需通过溶解曲线验证扩增特异性。
利用Taq酶外切酶活性切割荧光探针释放信号，特异性高、支持多重检测，需设计特异性探针。
从样本接收到报告交付，全流程SOP标准化操作，多重质控确保结果可靠
样本核对
登记入库
总RNA提取
RIN值/浓度检测
gDNA去除
cDNA合成
引物设计合成
荧光定量检测
溶解曲线分析
数据报告交付
| 定量方式 | 原理 | 适用场景 |
|---|---|---|
| 相对定量（2^-ΔΔCT法） | 比较目标基因与内参基因CT值差异，计算相对表达量变化倍数 | 差异表达基因验证、表达趋势分析、RNA-seq结果验证等大多数转录组研究场景 |
| 绝对定量 | 利用已知浓度标准品制作标准曲线，推算样品中靶基因的绝对拷贝数 | 病毒载量检测、病原体定量、基因拷贝数变异分析等需要绝对数值的场景 |
平台 + 质控 + 引物 + 分析 + 服务，全方位保障验证结果可靠
ABI QuantStudio高端仪器平台搭配预验证引物，低丰度基因准确检测，单拷贝级灵敏度。
NTC（无模板对照）、NRT（无逆转录对照）、内参基因、复孔设置多重质控，全面把控实验质量。
跨内含子设计避免gDNA干扰，全部引物经过预实验验证扩增效率（90%~110%）。
SOP标准化实验操作流程，使用进口试剂（ABI/TaKaRa/Vazyme），确保实验结果稳定可靠。
已完成数千例样本、上万个基因的qPCR验证，RNA-seq结果验证命中率高。
提供一致性分析、标志物筛选、通路分析、生存分析等深入分析内容。
从单基因验证到384孔高通量表达谱，从SYBR到TaqMan，灵活定制满足不同研究需求。
从小批量验证到高通量表达谱，覆盖不同研究规模需求
适合少量候选基因的快速验证，提供RNA提取到分析的完整服务。
适合RNA-seq后批量差异基因验证，含表达谱分析及与测序结果一致性分析。
96/384孔定制Primer Panel，针对特定通路或疾病进行高通量表达谱分析。
| 参数 | 说明 |
|---|---|
| 检测平台 | Applied Biosystems QuantStudio 5 / 7 Flex |
| 检测通量 | 96孔 / 384孔 板型可选 |
| 反应体系 | 10µL（96孔）/ 5µL（384孔） |
| 复孔设置 | 每个样本每个基因3个技术重复 |
| 引物扩增效率 | 90% ~ 110%，R² ≥ 0.99 |
| 复孔CV | ≤ 5%（CT值 SD ≤ 0.3） |
| 检测动态范围 | 101 ~ 1010 拷贝/反应 |
| 灵敏度 | 可检测低至单拷贝模板 |
从基础定量统计到深入的生物信息挖掘，提供系统化数据分析
RNA浓度、完整性、纯度检测结果汇总
扩增效率验证、溶解曲线分析、标准曲线R²
复孔平均CT值、标准差汇总表
2^-ΔΔCT法计算相对表达量变化倍数
t检验/ANOVA等统计检验，P值/FDR校正
表达柱状图、箱线图等可视化展示
相关性系数+命中率
聚类可视化
批量验证展示
诊断效能评估
KM曲线+Cox回归
表达模式聚类
通路功能富集分析
蛋白互作网络构建
ssGSEA / GSVA
个性化分析需求
* 具体分析内容可根据研究需求灵活调整，详询技术顾问
接受多种样本类型，专业技术人员全程指导样本准备
| 样本类型 | 推荐起始量 | 最低量 | 保存与运输 | 注意事项 |
|---|---|---|---|---|
| 总RNA | ≥ 2 µg | ≥ 500 ng | -80℃保存，干冰运输 | RIN ≥ 6.5，浓度 ≥ 50 ng/µL，OD260/280 = 1.8 - 2.1 |
| 组织 | ≥ 50 mg | ≥ 20 mg | -80℃保存，干冰运输 | 样本离体后迅速液氮冻存，避免反复冻融；肿瘤样本注明肿瘤细胞含量 |
| 细胞 | ≥ 1 × 106 | ≥ 5 × 105 | -80℃保存，干冰运输 | 收集细胞后PBS洗涤，加入裂解液或TRIzol后冻存；避免细胞凋亡 |
| 全血 | ≥ 2 mL | ≥ 1 mL | EDTA抗凝，4℃/冰袋运输 | 使用EDTA抗凝管，严禁肝素抗凝；采集后24小时内处理或冻存 |
| 血清/血浆 | ≥ 5 mL | ≥ 2 mL | -80℃保存，干冰运输 | 血浆推荐EDTA抗凝；避免溶血；分离后立即冻存 |
| FFPE | ≥ 5 张（10 µm） | ≥ 3 张 | 常温保存运输 | 石蜡包埋时间不超过5年为佳；切片厚度5-10 µm；提供HE染色结果确认肿瘤比例 |
| cDNA | ≥ 50 µL（≥ 50 ng/µL） | -20℃保存，冰袋运输 | 需提供逆转录方法及RNA原始质检信息 | |
内参基因推荐
推荐选择 2-3 个内参基因，采用 geNorm 算法筛选合适的内参组合，确保定量结果准确可靠。常用内参包括 GAPDH、ACTB、18S rRNA、β-tubulin 等，具体根据样本类型和研究目的选择。
* 样本量不足或特殊样本请咨询技术顾问，送样前建议先进行样本质量评估
从样本到数据全链路质控，确保每一份结果的准确性与可靠性
RNA浓度、纯度、完整性三重检测，RIN值评估
扩增效率90-110%，溶解曲线单峰，R²≥0.99
NTC无模板对照 + NRT无逆转录对照，防污染
三复孔CV≤5%，内参基因稳定性评估
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