转录组研究 lncRNA测序

lncRNA测序
长链非编码RNA表达与调控研究

去rRNA + 链特异性建库方案,同时检测mRNA与lncRNA表达谱,CNCI/CPC/Pfam三重筛选鉴定新lncRNA,支持顺式/反式调控功能预测

双RNA检测
mRNA + lncRNA
三重筛选
CNCI / CPC / Pfam
链特异性
dUTP建库方案
双维度调控
cis / trans
lncRNA Sequencing Strand-Specific
mRNA lncRNA PE 150 10-12G/sample Q30≥85% rRNA-depleted + Strand-Specific Library
去rRNA + 链特异性
v1.0
三重筛选鉴定
产品概述

lncRNA测序 · 解码非编码RNA的调控奥秘

长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)是一类长度大于200nt的非编码RNA分子,参与表观遗传调控、转录调控及转录后调控等多个层面,在发育分化、疾病发生、肿瘤进展等生物学过程中发挥重要作用。lncRNA测序采用去rRNA + 链特异性建库方案,同时检测mRNA与lncRNA的表达谱,通过生物信息学分析鉴定新的lncRNA并预测其功能,是研究非编码RNA调控机制的核心技术。

应用领域

发育分化调控
肿瘤发生发展
疾病标志物筛选
神经科学研究
免疫调控研究
药物作用机制
技术原理与实验流程

标准化实验流程

去rRNA + dUTP链特异性建库,确保lncRNA鉴定准确可靠

1
总RNA提取
样本RNA制备与质检
2
去除rRNA
保留mRNA+lncRNA
3
片段化反转录
dUTP二链合成
4
建库扩增
接头连接+UDG消化
5
高通量测序
PE150测序
6
生物信息分析
鉴定+定量+功能预测

技术特点

去rRNA建库方案,同时保留编码与非编码RNA

dUTP链特异性建库,保留转录本方向信息,反义lncRNA鉴定更准确

CNCI/CPC/Pfam三重编码潜能预测筛选,lncRNA鉴定更可靠

支持cis/trans两种调控模式的功能预测

测序策略

测序模式 PE 150
推荐数据量 10-12 G clean data /样本
数据质量 Q30 ≥ 85%
项目周期 视项目而定
技术优势

五大技术优势

建库 + 鉴定 + 分析 + 服务,全方位保障研究质量

成熟去rRNA方案

经过优化的去rRNA建库流程,rRNA残留率稳定低于5%,有效数据占比高。

链特异性建库

dUTP链特异性建库方法,完整保留转录本方向信息,反义lncRNA鉴定更准确。

三重筛选体系

CNCI/CPC/Pfam三种方法联合进行编码潜能预测,多重筛选降低假阳性,lncRNA鉴定结果更可靠。

全面功能预测

顺式(cis) + 反式(trans)双维度调控分析,深入解析lncRNA潜在生物学功能与调控机制。

多样本兼容

支持组织、细胞、FFPE、外泌体等多种样本类型,专业样本处理经验保障实验成功率。

专业生信分析

经验丰富的生信团队提供标准分析与高级分析,支持ceRNA网络、共表达网络等深度分析。

生物信息分析

生信分析内容

标准分析 + 高级分析可选,满足不同研究深度需求

标准分析

原始数据质控与过滤

参考基因组比对

mRNA + lncRNA表达定量(TPM/FPKM/Counts)

lncRNA鉴定(CNCI/CPC/Pfam三重筛选)

lncRNA分类(lincRNA/intronic/antisense/sense overlapping)

样本相关性与PCA分析

差异表达分析(mRNA + lncRNA)

GO/KEGG功能富集分析

高级分析(可选)

lncRNA顺式调控预测(cis)

lncRNA反式调控预测(trans)

可变剪接分析

融合基因分析

新转录本预测

ceRNA调控网络分析

共表达网络构建

样本要求

样本要求

多种样本类型兼容,专业技术团队全程指导样本准备

样本类型 推荐起始量 保存与运输 注意事项
总RNA 推荐5μg,最低2μg
RIN ≥ 6.5
-80℃ 保存,干冰运输 RNA完整性好,无降解;OD260/280=1.8-2.1;避免反复冻融
组织样本 100-200mg,最低50mg -80℃ 保存,干冰运输 新鲜组织离体后30分钟内液氮速冻,避免RNase污染;禁止使用RNAlater等保存液
细胞样本 5×106 ~ 1×107 细胞
最低 1×106
-80℃ 保存,干冰运输 收集细胞后PBS洗涤,去除上清后液氮速冻或直接加裂解液;避免培养基残留
FFPE样本 5-10张切片(10μm)
最低 3
常温保存,常温运输 FFPE样本需注明固定时间,建议固定时间不超过24小时;切片厚度10μm

* 生物学重复:每组至少3个生物学重复

* 样本量不足或特殊样本请咨询技术顾问

服务方案

三种服务方案

根据研究深度灵活选择,支持定制化分析内容

基础版

基础分析方案

标准分析内容,满足常规研究需求

去rRNA + 链特异性建库

PE150测序,10G clean data

mRNA + lncRNA表达定量

lncRNA鉴定与分类

差异表达与GO/KEGG富集

推荐
高级版

高级分析方案

包含调控预测,深入功能挖掘

基础版全部分析内容

lncRNA顺式调控预测(cis)

lncRNA反式调控预测(trans)

可变剪接分析

新转录本预测与融合基因分析

定制版

定制化方案

根据研究需求定制分析内容

高级版全部分析内容

ceRNA调控网络分析

共表达网络构建(WGCNA)

个性化图表与报告定制

一对一技术顾问支持

常见问题

FAQ

关于lncRNA测序服务,您可能想了解的问题

1. lncRNA测序和普通mRNA测序有什么区别?
主要区别在于建库方式和检测对象不同:
mRNA测序:采用polyA富集的方式捕获具有polyA尾的mRNA,只能检测编码RNA。优点是成本相对较低,数据量大,适合研究基因表达差异。缺点是无法检测lncRNA等非编码RNA,且部分无polyA尾的mRNA也会丢失。
lncRNA测序:采用去rRNA的建库方式,保留所有编码和非编码RNA,同时结合链特异性建库方法保留转录方向信息。可以同时检测mRNA和lncRNA的表达,还能鉴定新的lncRNA并进行功能预测。适合研究非编码RNA的调控机制。缺点是测序成本相对较高。
2. 为什么lncRNA测序推荐链特异性建库?
链特异性建库对于lncRNA研究尤为重要,原因如下:
反义lncRNA鉴定:许多lncRNA以反义方式与蛋白编码基因重叠,普通建库无法区分正义链和反义链的转录本,导致反义lncRNA的定量不准确。链特异性建库可以明确每条read来自哪条DNA链,准确鉴定反义lncRNA。
lncRNA分类更准确:链信息有助于更准确地将lncRNA分为lincRNA、intronic、antisense、sense overlapping等类型。
基因表达定量更准确:对于重叠基因和反义转录本,链特异性建库可以避免双向转录导致的定量干扰。
3. 如何判断鉴定到的lncRNA是否可靠?
我们采用CNCI/CPC/Pfam三重编码潜能预测的筛选策略来确保lncRNA鉴定的可靠性:
CNCI (Coding-Non-Coding Index):基于序列组成特征的编码潜能预测方法,不依赖序列比对,对新物种和低保守序列效果较好。
CPC (Coding Potential Calculator):基于序列比对和ORF特征的编码潜能预测方法,通过与已知蛋白数据库比对来评估编码能力。
Pfam:蛋白结构域数据库比对,如果转录本序列中含有已知的蛋白结构域,则认为其具有编码潜能。
只有同时通过三种方法预测为非编码的转录本才会被鉴定为lncRNA,多重筛选有效降低假阳性率。
4. lncRNA测序需要多少生物学重复?
生物学重复数量取决于研究目的和统计分析方法:
最低要求:每组至少3个生物学重复,这是进行差异表达统计分析的基本要求。
推荐数量:建议每组5-6个生物学重复,可以获得更稳健的差异表达分析结果,提高统计检验效力。
临床样本:由于个体差异较大,建议每组10个以上样本,以更好地反映群体水平的表达差异。
需要注意的是,技术重复不能替代生物学重复。生物学重复反映的是个体间的差异,对于统计推断至关重要。
5. FFPE样本可以做lncRNA测序吗?
FFPE(福尔马林固定石蜡包埋)样本可以进行lncRNA测序,但需要注意以下几点:
RNA降解:FFPE样本中的RNA通常存在不同程度的降解,且福尔马林会导致RNA交联和修饰。固定时间越长,降解越严重。建议尽量选择固定时间较短(24小时以内)的样本。
样本量要求:FFPE样本推荐5-10张切片(10μm厚度),最低3张。需要在送样前对RNA质量进行评估,包括RNA完整性和浓度检测。
数据质量:FFPE样本的测序数据质量通常略低于新鲜样本,可能存在一定程度的碱基偏好。但只要样本质量合格,仍可获得有意义的表达谱数据。建议在研究设计阶段咨询技术顾问,评估样本是否适合进行lncRNA测序。
资源中心

延伸研究 · 资源中心

更多转录组研究服务与学习资源

联系我们

开启您的lncRNA调控研究之旅

专业技术团队为您提供从实验设计到数据分析的全流程服务支持,欢迎联系我们获取定制化解决方案。

服务热线
021-58086128
邮箱
market@sinomics.com
地址
上海市康新公路3399弄26号楼7-8层

获取项目方案